Light sheet fluorescence microscopy
Date
2021-03
Authors
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Stellenbosch : Stellenbosch University
Abstract
ENGLISH ABSTRACT: Light sheet fluorescence microscopy is a powerful tool within the in field of
microscopy. The inherent advantages over other fluorescence microscopy techniques
include high sectioning capabilities, reduced photo-damage in the sample
and short data acquisition times. In this thesis, a light sheet microscope
is developed which allows the users to tailor the parameters of the light sheet
for various applications, by implementing the use of a spatial light modulator
(SLM) to dynamically alter the shape of the light sheet.
Three different techniques for light sheet generation are investigated, namely
by the use of a cylindrical lens, using an SLM, and by digitally scanning a
beam. Each of the techniques were characterised.
Using the light sheets, three dimensional fluorescence images are obtained.
These three dimensional images are analysed to determine the imaging capabilities
of the system, and the deconvolution of these images are implemented
for image restoration.
The result is a multi-purpose light sheet microscope for use in biological imaging.
AFRIKAANSE OPSOMMING: Ligblad fluoressensiemikroskopie is 'n kragtige tegniek binne die veld van mikroskopiese. Die voordele bo ander fluoressensie-mikroskopie-tegnieke sluit in 'n hoë snyvermoë, verminderde fotoskade in die monster en kort dataverkrygingstye. In hierdie proefskrif word 'n ligbladmikroskoop ontwikkel wat gebruikers in staat stel om die parameters van die ligblad vir verskillende toepassings aan te pas deur die gebruik van 'n ruimtelike ligmodulator (RLM) om die vorm van die ligblad dinamies te verander. Drie verskillende tegnieke vir ligblad vorming word ondersoek, naamlik deur die gebruik van 'n silindriese lens, met behulp van 'n RLM, en deur 'n ligstraal digitaal te skandeer. Elk van die tegnieke word gekarakteriseer. Met behulp van die ligblad word driedimensionele fluoressensiebeelde verkry. Hierdie driedimensionele beelde word geanaliseer om die beeldvermoëns van die stelsel te bepaal, en die dekonvolusie van hierdie beelde word geimplementeer vir beeldherstel. Die resultaat is 'n veeldoelige ligbladmikroskoop vir beeldvorming in biologie.
AFRIKAANSE OPSOMMING: Ligblad fluoressensiemikroskopie is 'n kragtige tegniek binne die veld van mikroskopiese. Die voordele bo ander fluoressensie-mikroskopie-tegnieke sluit in 'n hoë snyvermoë, verminderde fotoskade in die monster en kort dataverkrygingstye. In hierdie proefskrif word 'n ligbladmikroskoop ontwikkel wat gebruikers in staat stel om die parameters van die ligblad vir verskillende toepassings aan te pas deur die gebruik van 'n ruimtelike ligmodulator (RLM) om die vorm van die ligblad dinamies te verander. Drie verskillende tegnieke vir ligblad vorming word ondersoek, naamlik deur die gebruik van 'n silindriese lens, met behulp van 'n RLM, en deur 'n ligstraal digitaal te skandeer. Elk van die tegnieke word gekarakteriseer. Met behulp van die ligblad word driedimensionele fluoressensiebeelde verkry. Hierdie driedimensionele beelde word geanaliseer om die beeldvermoëns van die stelsel te bepaal, en die dekonvolusie van hierdie beelde word geimplementeer vir beeldherstel. Die resultaat is 'n veeldoelige ligbladmikroskoop vir beeldvorming in biologie.
Description
Thesis (MSc)--Stellenbosch University, 2021.
Keywords
Fluorescence microscopy -- Technique, Media reconstruction, LED light sheets, UCTD, Microtomy, Three-dimensional imaging